在免疫沉淀中,Sigma F1804与蛋白A琼脂糖珠结合,捕获FLAG融合蛋白。孵育时间1-2小时,洗脱用FLAG肽。
Western blot应用中,稀释1:5000,孵育过夜。使用HRP偶联二抗增强信号,曝光时间优化为5-10分钟。
作为工具,其高特异性减少背景噪音,适用于低丰度蛋白检测。结合质谱分析,可鉴定蛋白互作。
实验前预热抗体,避免气泡。数据分析使用ImageJ软件量化条带强度。
与其他工具整合,如与Ni-NTA柱联用,提升纯化通量。定期校准以维持一致性。
掌握这些技巧,Sigma F1804。