原生质体制备主要通过复合酶液（如纤维素酶、蜗牛酶）酶解去除细胞壁，获得无壁原生质体。酶浓度、pH值、温度及预处理时间是关键工艺参数，直接影响得率与活性。

在工业发酵领域，该技术常用于链霉菌、米曲霉等菌株改造，经DTT预处理后酶解48h，可获高纯度原生质体，用于融合育种与外源DNA导入。

再生培养需渗透压稳定剂如氯化钠或山梨醇，有助于原生质体恢复细胞壁并形成菌落，推动生物制药与酶制剂产业升级。