GST Pull-Down实验标准流程：高效筛选蛋白相互作用
问GST Pull-Down实验标准流程：高效筛选蛋白相互作用
答首先利用IPTG诱导表达GST标签融合蛋白，经谷胱甘肽琼脂糖珠子纯化后得到bait蛋白，需确保纯度与活性。 将bait蛋白与预处理后的细胞裂解液或纯化prey蛋白孵育4小时以上，之后用含低浓度Tween-20的缓冲液洗涤5-6次去除非特异结合。...
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📋 GST Pull-Down实验标准流程：高效筛选蛋白相互作用 详细介绍
首先利用IPTG诱导表达GST标签融合蛋白，经谷胱甘肽琼脂糖珠子纯化后得到bait蛋白，需确保纯度与活性。
将bait蛋白与预处理后的细胞裂解液或纯化prey蛋白孵育4小时以上，之后用含低浓度Tween-20的缓冲液洗涤5-6次去除非特异结合。
最终加入SDS样品缓冲液煮沸洗脱，Western blot检测prey蛋白是否被有效拉下，即可判断两者是否存在直接相互作用。
🧭 核心要点
- 要首先利用IPTG诱导表达GST标签融合蛋白，经谷胱甘肽琼脂糖珠子纯化后得到bait蛋白，需确保纯度与活性
- 要将bait蛋白与预处理后的细胞裂解液或纯化prey蛋白孵育4小时以上，之后用含低浓度Tween-20的缓冲液洗涤5-6次去除非特异结合
- 要最终加入SDS样品缓冲液煮沸洗脱，Western blot检测prey蛋白是否被有效拉下，即可判断两者是否存在直接相互作用