Western Blot实验中二抗选择与优化关键技术
问Western Blot实验中二抗选择与优化关键技术
答二抗需与一抗种属匹配，常用HRP或AP标记的山羊抗兔/鼠IgG。工作浓度一般为1:5000~1:20000，过高易产生非特异背景。 为降低背景噪声，建议加入0.05%-0.1%Tween-20于封闭与抗体孵育液中，并适当延长漂洗时间。...
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📋 Western Blot实验中二抗选择与优化关键技术 详细介绍
二抗需与一抗种属匹配，常用HRP或AP标记的山羊抗兔/鼠IgG。工作浓度一般为1:5000~1:20000，过高易产生非特异背景。
为降低背景噪声，建议加入0.05%-0.1%Tween-20于封闭与抗体孵育液中，并适当延长漂洗时间。
显色体系选择上，化学发光法灵敏度最高，适用于低丰度蛋白检测；DAB法显色直观，适合教学与常规定性分析。
🧭 核心要点
- 要二抗需与一抗种属匹配，常用HRP或AP标记的山羊抗兔/鼠IgG
- 要为降低背景噪声，建议加入0.05%-0.1%Tween-20于封闭与抗体孵育液中，并适当延长漂洗时间
- 要显色体系选择上，化学发光法灵敏度最高，适用于低丰度蛋白检测；DAB法显色直观，适合教学与常规定性分析